Primer walking
Cette méthode de séquençage est particulièrement indiquée pour :
Principe
L’utilisation de plusieurs amorces permet d’obtenir des séquences chevauchantes aboutissant à la reconstitution du produit complet. Pour le séquençage d’un insert, une amorce universelle est utilisée pour obtenir un fragment de la séquence du vecteur et le début de l’insert.
Le design d’une amorce spécifique peut ensuite être réalisé sur la séquence obtenue et permettre d’obtenir la suite. Si la séquence d’intérêt est connue, l’ensemble des réactions de séquençage peut être réalisée simultanément. Cette prestation peut être réalisée en simple ou double sens.
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Détection de mutations
Le séquençage Sanger peut être utilisé pour vérifier :
Principe
Cette application est notamment utilisée couramment pour le contrôle de TILLING (Targeting Induced Local Lesions in Genomes) sur les plantes, ou pour la vérification de mutations sur des gènes d’intérêt.
Nous pouvons designer des amorces spécifiques pour cibler une mutation et la vérifier par comparaison à une séquence de référence fournie.
Si plusieurs mutations/positions sont à vérifier sur une même zone du génome, nous pouvons également éditer un rapport de variance détaillé par rapport à un gène de référence.